【免費(fèi)干貨】了解凝膠滲透色譜（GPC）如此簡單

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一、基本介紹：

凝膠滲透色譜(GelPermeationChromatography，簡稱:GPC)一種快速而又簡單的分離分析技術(shù)，由于設(shè)備簡單、操作方便，不需要有機(jī)溶劑，對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。。不僅可用于小分子物質(zhì)的分離和鑒定，而且可以用來分析化學(xué)性質(zhì)相同分子體積不同的高分子同系物。(聚合物在分離柱上按分子流體力學(xué)體積大小被分離開）

二、基本原理：

當(dāng)被分析的試樣隨著淋洗溶劑引入柱子后，溶質(zhì)分子即向填料內(nèi)部孔洞擴(kuò)散。較小的分子除了能進(jìn)入大的孔外，還能進(jìn)入較小的孔;較大分子則只能進(jìn)入較大的孔;而比最大的孔徑還要大的分子就只能留在填料顆粒之間的空隙中。因此，隨著溶劑的淋洗，大小不同的分子就得到分離，較大的分子先被淋洗出來

較小的分子較晚被淋洗出來。

三、樣品要求

1. 樣品狀態(tài)：可為液體、粉末、塊狀樣品;

2.樣品要求在指定流動相中有較好的溶解性，樣品量要求10mg左右。
3.如果樣品溶解性較差，要求提前溶解好（濃度要求在2-5mg /ml左右），或者提供合理溶解方法

四、常見問題

1、把激光光散射與凝膠色譜儀聯(lián)用

在得到濃度譜圖的同時，還可得到散射光強(qiáng)對淋出體積的譜圖，從而計算出分子量分布曲線和整個試樣的各種平均分子量。

⒉、樣本的準(zhǔn)備

激光光散射實驗中必須對樣品嚴(yán)格除塵。溶液除塵是光散射成敗的關(guān)鍵。首先是溶劑除塵，配置測試樣品的溶劑應(yīng)進(jìn)行精餾，并經(jīng)過0.2um超濾膜過濾后方可使用。配好的溶液也要用0.2um的超濾膜過濾。另外，測試中所用的器械，如:注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水強(qiáng)力沖洗。

3、相對分子量和絕對分子量的區(qū)別?

第一，測試原理不同:相對分子星時通過建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣品與之相比得到分子量分布;絕對分子量是通過三聯(lián)檢測器，主要是激光檢測器在樣品顆粒表面散射角度不同通過數(shù)學(xué)模型計算分子量分布;第二，檢測器不同:相對分子量主要是折光示差檢測器，絕對分子量需要示差，濃度，激光三聯(lián)檢測器;第三，檢測分子量范圍不同:相對分子量可以檢測較小分子量，而一般分子量在幾萬以上才適合絕對分子量。

4、GPC系統(tǒng)如何平衡

(1）安裝色譜柱之前，用兩通管連接管路，用流動相替換系統(tǒng)后換上GPC柱子(注意溶劑互溶情況)。

(2)RID平衡操作分析開始前，用流動相沖洗檢測器流路。流動相流速1mL/min，切換到RFlow，使流動相通過檢測池的樣品池和參比池，沖洗20min左右。然后切換R Flow流路數(shù)次，將氣泡趕出檢測池。

關(guān)閉R Flow，等待基線平穩(wěn)。當(dāng)Balance值高于50，進(jìn)行

Balance調(diào)整。

(3）色譜柱平衡等溶劑峰出峰后再經(jīng)過約一次分析時間后，基線才能走平。

5、為什么樣品要求在指定流動相中溶解性要好？

因為GPC（凝膠滲透色譜）本質(zhì)上是一個色譜測試，是通過色譜柱分離不同分子量的成分，溶解性不好的話是需要過濾后測試的，不溶成分的分子量就無法測試，而且如果樣品溶解度差的話，樣品有可能會在色譜柱析出，毀壞柱子。

6、為什么測試結(jié)果跟預(yù)期分子量差別較大？

第一，GPC的測試原理是每種流動相都有對應(yīng)的一種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作出的標(biāo)準(zhǔn)曲線，樣品測試結(jié)果要跟標(biāo)曲比較，然后得出測試結(jié)果，所以大多數(shù)流動相得到的結(jié)果是樣品的相對分子量，如果樣品跟標(biāo)準(zhǔn)品差別太大的話，測試結(jié)果就有可能跟真實值相差較大；第二，GPC一般測試樣品都是聚合物，預(yù)期分子量只是基于實驗設(shè)計的一個預(yù)期值，所以有時候跟實際情況有出入也是正常的。

五、哪里可以做GPC測試？

鑠思百檢測可提供GPC檢測服務(wù)

具體聯(lián)系客服，可送樣檢測