生物樣品在掃描電鏡時會遇到哪些問題

生物樣品在掃描時會遇到哪些問題

掃描電鏡可以用來觀察生物樣品表面的細小形態(tài)特征，比光學顯微鏡能觀察到更詳細更細微的結構，是生物學研究的重要手段。為了得到更清晰更真實的掃描電鏡觀察結果，樣品的制備過程比較關鍵。

生物樣品的含水量一般為70% ~ 80% ,僅有少數(shù)樣品如毛發(fā)、牙齒角質(zhì)以及含水量極低的昆蟲等可以直接噴鍍觀察絕大多數(shù)的生物樣品均要求經(jīng)過干燥處理才能鍍金和進行掃描電鏡觀察。干燥是掃描電鏡生物樣品制備中的關鍵環(huán)節(jié)如果處理不好會直接影響到觀察的清晰度與準確度甚至直接導致試驗失敗。要想制備出好的掃描電鏡生物樣品要求在干燥過程中盡可能減少由于水分蒸發(fā)而引起的樣品表面形貌的變形，如體積變化、結構皺縮或干裂等。且必須確保干燥徹底。大多數(shù)動植物特別是柔軟的細胞和組織在干燥時由于體積應力和表面張力的作用,容易發(fā)生明顯的塌陷和變形。因此需要針對不同的生物樣品來選擇合適的干燥方法在樣品不受或少受表面張力等因素的影響下不變地將液體去掉,達到干燥的目的。

近年來出現(xiàn)了環(huán)境掃描電鏡和冷凍掃描電鏡等可觀察含水樣品的掃描電鏡，但觀察方法的分辨率較低。

干燥的方法很多,比如臨界點干燥法、自然干燥法、冷凍干燥法、叔丁醇真空干燥法、六甲基二硅胺烷干燥法，乙腈干燥法、烘干干燥法、氮氣干燥法和微波干燥法等。這些方法各有利弊,且適用樣品種類不同。因此根據(jù)生物樣品的特性選擇一種適宜的干燥方法十分重要。

對于常規(guī)的掃描電子顯微鏡來說，用于觀察的樣品必須是干燥的。含有水分的樣品在掃描電鏡的真空鏡筒中會造成很多不良影響：

（1）樣品收到電子束轟擊后會產(chǎn)生的水蒸氣會遭遇電子流，引起電子流大幅度波動，使圖像模糊出現(xiàn)霧狀，甚至根本不能無法成像。

（2）大多數(shù)樣品在高真空中容易發(fā)生形態(tài)損傷，使得研究特征皺縮，變形。

（3）會造成物鏡、鏡頭、光闌等的污染。

（4）燈絲遇到水蒸氣會氧化變質(zhì)甚至熔斷。

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